IVD質(zhì)控品定量之數(shù)字PCR檢測
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作者:沃小森
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發(fā)布時間: 2024-08-15
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在體外診斷（IVD）行業(yè)中，涉及的各類參考物質(zhì)如參考品、質(zhì)控品、質(zhì)控物、對照品、標準物質(zhì)、標準品、校準品、校準物等等，在產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、使用、監(jiān)管等過程中分別發(fā)揮不同的作用。這些參考物質(zhì)定值的準確性是至關重要的。
分子診斷產(chǎn)品的參考物質(zhì)定值，通常是指對參考物質(zhì)中的核酸（DNA或RNA）拷貝數(shù)的測定。傳統(tǒng)方法，是用基于qPCR平臺的**定量，主要過程是合成含有待測靶標序列的質(zhì)粒，測定高濃度質(zhì)粒的質(zhì)量濃度后按照質(zhì)粒大小換算拷貝數(shù)，再以此高濃度質(zhì)粒為標準進行梯度稀釋做qPCR 拷貝數(shù)和CT值對應的標準曲線，后續(xù)待測樣本的CT值帶入標曲公式，可得出樣本的靶核酸拷貝數(shù)。這個方法的主要問題在于：
1、質(zhì)粒質(zhì)量濃度檢測的準確性。常用的方法為Nanodrop為代表的分光光度計法，該方法特異性不夠，且較易受雜質(zhì)影響，在純度不好的情況下，結(jié)果偏差可能有5倍、甚至超10倍的偏差。做標曲用的質(zhì)粒濃度不對，后續(xù)的整個定量實驗都是不成立的了。
2、qPCR的定量計算基于CT值換算，而CT值會受到很多因素影響：試劑擴增性能、引物探針設計、閾值線劃定、樣本中抑制物等等。
當然如果上述問題都可以盡量優(yōu)化到*佳程度，qPCR的定量也是可以做到比較準確的。但是否有更好的方法，直接屏蔽這些問題呢？那就是數(shù)字PCR！
自2008年**臺商業(yè)化數(shù)字PCR平臺問世，數(shù)字PCR開始正式走向廣大用戶。數(shù)字PCR技術是將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后，對每個微滴進行檢測，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。數(shù)字PCR是一個全新的**定量方式，與傳統(tǒng)定量PCR相比，其結(jié)果的精密度、準確性和靈敏度更佳，結(jié)果不依賴Ct值，直接給出靶序列濃度，實現(xiàn)真正意義上的**定量。
全球數(shù)字PCR賽道，從2016年以后進入活躍狀態(tài)，目前國內(nèi)外已發(fā)布幾十款產(chǎn)品。數(shù)字PCR*核心的技術是樣本的分割，根據(jù)分割方法主要可分為兩大派系，一是基于微孔板的芯片式分割，二是基于微流控技術的微滴生成式法?；谖⒖装宸ǚ指顣绊憳颖揪恍裕ㄎ⒖纂m是大小均一，但是入孔的試劑體積無法**控制），進而影響結(jié)果準確性。目前以油包水的微流控液滴生成技術為市場主流，但微流控芯片的微通道對表面光潔度、表面能、表面活性劑等要求很高，且國內(nèi)沒有成熟配套的工業(yè)制造體系，使得整體成本還比較高。蘇州思納福采用的是一種全新的液滴生成方法——振動注射技術，通過毛細管加樣針插入到油面下，快速擺動的同時均勻向外排出液體形成微滴，液滴大小僅由流速和震動頻率決定，生成的微滴體積精度高且體積可控，液滴批間一致性良好。2022年3月思納福DQ24數(shù)字PCR率先進入創(chuàng)新醫(yī)療器械特別審查程序，有望成為國內(nèi)首批獲得三類醫(yī)療器械注冊的數(shù)字PCR平臺。目前，IVD行業(yè)多家單位已使用Sniper設備進行標準品的制備和檢測，Sniper產(chǎn)品和技術在IVD質(zhì)控品領域得到了充分的認可！
總的來看，數(shù)字PCR的設備價格和使用成本仍相對較高，2023年以來后疫情時代的經(jīng)濟形式下，有預算采購這樣的儀器設備的企業(yè)明顯減少，而相關的定值需求仍然是大量存在的，外送技術服務成為一個更劃算的方案。杭州沃森生物于2021年開始，基于思納福的DQ24全自動數(shù)字PCR一體機，推出了數(shù)字PCR定量檢測技術服務，目前已為數(shù)十家企業(yè)和科研單位客戶提供服務。
杭州沃森生物數(shù)字PCR檢測服務服務周期短 ：1.5-2h檢測時長
可多重檢測 ： 6色熒光通道
靈敏度高 ：液滴有效率高、樣本有效利用率高
**度高 ：高效擴增試劑，提高樣本檢測**度
試劑開放 ：兼容客戶試劑體系，可采用在研IVD產(chǎn)品qPCR試劑，直接對比杭州沃森作為蘇州思納福簽約代理商，數(shù)字PCR試劑耗材成本更可控，服務價格更具競爭力，歡迎來電咨詢：0571-86495259！
